产品货号：
KL230378
中文名称：
DNA片段化试剂盒(酶切法)
英文名称：
DNA Fragmentation Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是利用酶法对DNA进行片段化的试剂盒。
保存：-20℃，有效期1年。
电泳上样缓冲液，推荐使用Orange G作为电泳示踪剂，因为溴酚蓝（BPB）和二甲苯青（Xylene Cyanol）与DNA片段重叠，应避开使用。
一、基因组DNA片段化反应
二、末端平滑化反应
相关搜索：DNA片段化试剂盒(酶切法)，DNA片段化，NGS测序，DNA Fragmentation Kit
- 即开即用，用户不用单独购买各种成分并进行优化。
- 操作简便省时，只需要在样本中加入片段化酶，再反应一段时间即可。
- 跟后续的高通测序（NGS）兼容。
- 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
| 组分 | 规格 |
| DNA片段化试剂盒(酶切法) | 20T |
| 片段化酶1 | 20μL |
| 片段化酶1稀释液 | 1040μL |
| DNA片段化溶液A | 20μL |
| DNA片段化溶液B | 50μL |
| DNA片段化反应终止液 | 400μL |
| 150mM MgCl2溶液 | 40μL |
| 片段化酶2稀释液 | 200μL |
| 片段化酶2 | 20μL |
| DNA级EDTA溶液 | 50μL |
| 超纯水 | 1mL×10 |
保存：-20℃，有效期1年。
电泳上样缓冲液，推荐使用Orange G作为电泳示踪剂，因为溴酚蓝（BPB）和二甲苯青（Xylene Cyanol）与DNA片段重叠，应避开使用。
一、基因组DNA片段化反应
- 确定反应体积。
- 基因组DNA在100ng以下使用10μL反应体系；基因组DNA在100ng～1μg之间使用20μL反应体系。
- 基因组DNA超过1μg时，以1μg/20μL的反应体系增加反应管数或扩大反应体系，很好地为5μg/100μL。
- 将2台Thermal Cycler PCR仪的温度分别设定为16℃和70℃。只有1台仪器时设定为16℃。
- 在冰上将基因组DNA以外的下列试剂添加到0.2mL反应管中，配制混合液，充分混匀后再加入基因组DNA。用移液枪轻轻吸打或用手轻弹管壁，离心后使用，避免产生气泡，不能使用振荡器混匀。
成分 用量 片段化酶1稀释液 1.9μL DNA片段化溶液A 1μL DNA片段化溶液B 1μL 自备的基因组DNA 1μg 超纯水 至19μL - 以上为基因组DNA 1μg/20μL反应体系；如果基因组DNA量少，那么要调整为适合的体系。
- 片段化酶1的稀释（使用前新鲜调制）。稀释方法如下：在冰上按下列顺序在1.5mL反应管中加入450μL超纯水和50μL片段化酶1稀释液，充分混匀。轻轻振荡离心。将1μL的片段化酶1加入到配好的混合液中，然后将200μL的移液枪调到100μL刻度后，轻轻吸打10次左右，避免产生气泡。再上下颠倒混匀（5次以下），离心。不能使用振荡器混匀。
- 稀释后的片段化酶1请在10分钟内使用，不能保存。
- 确认Thermal Cycler PCR仪的温度在16℃后，将1μL稀释后的片段化酶1添加到上述加入基因组DNA的混合液中。吸打数次后，立即在16℃条件下进行反应。推荐反应时间5～8分钟。
- 在冰上进行试剂添加和混匀的操作。
- 不要移动反应管，在Thermal Cycler PCR仪上直接加入20μL的DNA片段化反应终止液终止反应。用移液枪吸打2～3次后，再转移到冰上吸打数次。
- 确认Thermal Cycler PCR仪温度为70℃后，将吹打后溶液的0.2mL反应管转移到PCR仪上。
- 70℃反应5分钟后，转移到冰上。
- 在冰上放置2分钟以上。
- 只进行DNA片段化反应时，在冰上放置后的0.2mL反应管中加入1μL的0.5M EDTA溶液，用移液枪吸打，充分混匀后，进行DNA片段的精制。
二、末端平滑化反应
- 将两台扩增仪分别设定为16℃和70℃。如果只有一台，则设定为16℃。
- 片段化酶2的稀释（使用前调制）。稀释方法：在冰上准备0.2mL反应管，试剂按下述的比例（片段化酶2稀释液:片段化酶2=9:1）配成混合液后，轻轻吸打，充分混匀，避免产生气泡。
- 在在冰上放置后的0.2mL反应管中加入2μL的150mM MgCl2溶液，移液枪吸打，充分混匀，避免产生气泡。不能使用振荡器混匀。
- 将2μL稀释后的片段化酶2添加到0.2mL反应管中，吸打数次混匀后，立即在16℃反应10分钟。
- 此步操作在冰上进行。
- 反应结束后，把0.2mL反应管转移到冰上。只有一台扩增仪时，把温度调至70℃。
- 加入1μL的0.5M EDTA溶液，充分吸打混匀后离心。
- 确认Thermal Cycler PCR仪设定的温度为70℃后，将0.2mL反应管转移到Thermal Cycler PCR仪上反应5分钟。
- 将0.2mL反应管转移到冰上。
- 片段化DNA的确认：取相当于200～250ng量基因组DNA（在冰上放置后）的反应液约10μL进行1.5%琼脂糖凝胶电泳。
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